· polyacrylamidegel moet door acrylamidemonomeer, polymerisatie-uitgangsmateriaal, katalysator en het zout- en buffermengsel samen.
· acrylamideen BIS (N,N'-methyleendubbelacrylamide) is de gelmatrix in de monomeervorm.
· ammoniumpersulfaat start het lijmpolymerisatieproces.De formulering van de lijm vereist een 10% ammoniumpersulfaatoplossing bereid in water.Uit de meeste informatie bleek dat er behoefte was aan actief gebruik.De 10%-oplossing kan echter enkele weken bij 4℃ worden bewaard zonder noemenswaardig activiteitsverlies.Vul tot 10 ml aan en gooi deze weg als de lijm niet goed hecht.
Tip: Het percentage vanacrylamidebij sequencing zijn lijm en eiwitlijm niet hetzelfde.Als u kant-en-klaar acrylamide: BIS-oplossing gebruikt, zorg er dan voor dat u de juiste fles aanschaft.
· TEMED (N, N, N ', N '- tetramethylethyleendiamine) is een katalysator, in een bruine fles, die in de koelkast wordt geplaatst.Voeg vlak voor het gieten van lijm toe.
· polyacrylamide-elektroforese gebruikt glas bij elektroforese moet voor en na elke keer worden gewassen.Na de elektroforese met een zachte borstel en doek in warm zeepsop wassen, met gedestilleerd water afspoelen en laten drogen.
· vocht en stof kunnen veroorzaken bij hol polymeer.Reinig vóór de elektroforese de glasplaat met glasreiniger en veeg deze af met een zachte borstel.Wassen met gedestilleerd water en grondig drogen met een papieren doekje.Spoelen met 70% ethanol voordat u het met papier afveegt, helpt bij het reinigen en versnellen van het drogen.Voeg achtereenvolgens monsters acrylamide toe: BIS, water, bufferoplossing, ammoniumpersulfaat, TEMED.Goed schudden en onmiddellijk gieten.
Het is niet nodig om polyacrylamide vóór de polymerisatie te ontgassen.(Acrylamide werd vroeger in een vacuüm geplaatst om luchtbellen te verwijderen, omdat zuurstof de polymerisatie remt.)
Horizontale lijmpuntmonsterpunten.
· plaats een stuk zwart papier in de onderste doos, met een zwarte achtergrond, zodat u een monstergaatje kunt maken om het duidelijker te kunnen zien.
· met lijmtank gevulde buffer, net boven het colloïd.
· als de rand licht heeft, doe dan de lichten aan, laat het licht colloïdaal schijnen.Trek het monster in de pipet.
· gebruik van een automatisch pipetteerapparaat.
· in 10-200 mu kan op de meeste punten op het monster 1 vloeibaar bewegend punt worden gebruikt.Voor zeer kleine monstergaten (minder dan 10μ1) is de lange pipetkop die wordt gebruikt voor het sequencen van lijm handiger.
· pipetteren net ondergedompeld in het monster, waarbij langzaam bewegende vloeistof wordt ingeademd.Het monster kan er plakkerig uitzien door de glycerine, en door snel pompen kunnen er luchtbellen in de pipetkop terechtkomen.
· monsters na het inademen van de pipetteerkop, zullen de vloeistofkop voorzichtig over de rand van de buis bewegen of het veegpapier zuigen de vloeistofkop buiten de druppels.Zorg ervoor dat u niet aan het monster zuigt.
Plaats het monster in het monstergat
· Pipetteerapparaat om een beetje druk te houden, waardoor de monsters lichtjes over de vloeistofkop bewegen.
· de pipetteerkop die in de buffer is geplaatst, iets hoger dan de spotgaten, zorgt voor een positieve druk.De punt van de pipet kan in een klein gaatje worden gestoken.
· langzaam en gestaag de monsters eruit.De pipetpunt wordt boven het puntmonstergat geplaatst en het monster zinkt in het gat.Laat het monster zinken om het monstergat te vullen in plaats van erin te duwen.
· zodra de laatste druppel monster met vloeistofkop is bereikt, zal de vloeistof naar het tweede been bewegen, de vloeistofbeweging langzaam verhogen en uit de buffer bewegen
Hoe verticale lijmbemonstering uitvoeren?
· verticale lijmpuntmonstergaten gevormd tussen twee stukken glas.Bij zeer dunne lijm kan de pipetkop niet eens tussen twee glasplaten worden gestoken.Let op de glycerine!Plaats de pipetkop over het monstergat en het monster zakt in het gat.
· puntmonster voordat u het verticale punt van het monstergat van polypropyleenacylgel plaatst en schoonspoelt.Spoel het niet-gepolymeriseerde acrylamide en het water weg dat op de bodem van het monstergat kan verschijnen.Het water kan het monstergat aanzienlijk kleiner maken.Gebruik een spuit van 25 ml of 50 ml en een naald van 18 gauge.Giet de elektroforesebuffer erin en spoel het monstergat zorgvuldig door.
· het kan moeilijk zijn om het monstergat te zien, maar tegelijkertijd is de rest eenvoudig.Als er overtollige gaten zijn, kan de monsterbuffer worden getest met broomfenolblauw.
Posttijd: 31 maart 2023