· polyacrylamidegel moet bestaan uit acrylamidemonomeer, polymerisatie-uitgangsmateriaal, katalysator en de juiste hoeveelheid zout en buffermengsel.
· acrylamideen BIS (N, N'- methyleendubbelacrylamide) is de monomeervorm-gelmatrix.
· Ammoniumpersulfaat start het polymerisatieproces van de lijm. De formulering van de lijm vereist een 10% ammoniumpersulfaatoplossing, bereid in water. De meeste informatie gaf aan dat actief gebruik noodzakelijk is. De 10%-oplossing kan echter enkele weken bij 4 °C worden bewaard zonder significant activiteitsverlies. Vul aan tot 10 ml en gooi weg wanneer de lijm niet aggregeert.
Tip: Het percentage vanacrylamideBij het sequencen is lijm niet hetzelfde als proteïnelijm. Zorg ervoor dat je de juiste fles gebruikt als je een kant-en-klare acrylamide:BIS-oplossing gebruikt.
· TEMED (N,N,N',N'-tetramethylethyleendiamine) is een katalysator, in een bruine fles, geplaatst in de koelkast. Voeg vlak voor het gieten lijm toe.
· Polyacrylamide-elektroforeseglas dat bij elektroforese wordt gebruikt, moet voor en na elke elektroforese worden gewassen. Na elektroforese wassen met een zachte borstel en doek in heet zeepsop, afspoelen met gedestilleerd water en laten drogen.
· Vocht en stof kunnen een oorzaak zijn van hol polymeer. Reinig de glasplaat vóór elektroforese met glasreiniger en veeg deze af met een zachte borstel. Was met gedestilleerd water en droog grondig af met een papieren doekje. Spoelen met 70% ethanol vóór het afvegen met papier helpt bij het reinigen en versnelt het drogen. Voeg achtereenvolgens acrylamidemonsters toe: BIS, water, bufferoplossing, ammoniumpersulfaat, TEMED. Goed schudden en direct uitgieten.
Het is niet nodig om polyacrylamide te ontgassen vóór polymerisatie. (Vroeger werd acrylamide in een vacuüm geplaatst om luchtbellen te verwijderen, omdat zuurstof de polymerisatie remt.)
Voorbeeldtips voor horizontale lijmpunten.
· Leg een stuk zwart papier in de onderste doos en plaats een zwarte achtergrond om een gaatje te maken voor het monster, zodat u het duidelijker kunt zien.
· lijmtank gevuld met buffer, net boven het colloïde.
· Als er een lichtje aan de rand zit, zet dan het licht aan en laat het colloïde licht schijnen. Zuig het monster op in de pipet.
· met behulp van een automatisch pipetteerapparaat.
· In 10-200 mu 1 vloeistof kan het bewegende punt in de meeste punten van het monster worden gebruikt. Voor zeer kleine monstergaten (kleiner dan 10 μ1) is de lange pipetkop die voor sequentielijm wordt gebruikt, handiger.
· Pipetteer net ondergedompeld in het monster en inhaleer langzaam stromende vloeistof. Het monster kan plakkerig aanvoelen door de glycerine, en snel pompen kan luchtbellen in de pipetkop trekken.
· Monsters na het inhaleren van de pipetteerkop bewegen de vloeistofkop voorzichtig langs de rand van de buis of zuigen de vloeistofkop buiten de druppels aan met een afveegpapier. Pas op dat u het monster niet opzuigt.
Plaats het monster in het monstergat
· pipetteerapparaat om een kleine druk te behouden, zodat de monsters lichtjes over de vloeistofkop kunnen bewegen.
· De pipetteerkop, iets hoger dan de punctiegaten, in de buffer gestoken, zorgt voor een positieve druk. De punt van de pipet kan in een klein gaatje worden gestoken.
· Laat de monsters langzaam en gelijkmatig uitstromen. Plaats de pipetpunt boven het monstergat en het monster zakt in het gat. Laat het monster zakken om het monstergat te vullen in plaats van het erin te duwen.
· zodra de laatste druppel van het monster met vloeistofkop is, zal de vloeistof naar het tweede been bewegen, langzaam de vloeistofbeweging optillen, uit de buffer bewegen
Hoe voer je verticale lijmmonsters uit?
· verticale lijmpuntmonstergaten gevormd tussen twee glasplaten. Bij zeer dunne lijm kan de pipetkop niet eens tussen twee glasplaten worden gestoken. Pas op voor de glycerine! Plaats de pipetkop over het monstergat en het monster zakt erin.
· Zorg ervoor dat de verticale punt van de polypropyleenacylgel van het monstergat schoon is gespoeld voordat u het monsterpunt plaatst. Spoel het niet-gepolymeriseerde acrylamide en het water dat zich mogelijk op de bodem van het monstergat bevindt weg. Het water kan het monstergat aanzienlijk verkleinen. Gebruik een spuit van 25 ml of 50 ml en een naald van 18 gauge. Giet de elektroforesebuffer erin en spoel het monstergat zorgvuldig.
· Het kan moeilijk zijn om het monstergat te zien, maar de rest is eenvoudig. Als er te veel gaten zijn, kan de monsterbuffer worden getest met broomfenolblauw.
Plaatsingstijd: 31-03-2023