· polyacrylamideGel moet door acrylamide -monomeer, polymerisatie -startmateriaal, katalysator en het recht van zout- en buffermengsel samen.
· acrylamideen bis (n, n '- methyleen dubbele acrylamide) is de monomeervorm gelmatrix.
· Ammonium Persulfaat Start lijmpolymerisatieproces. De formulering van de lijm vereist 10% ammoniumpersulfaatoplossing bereid in water. De meeste informatie gaf aan dat actief gebruik nodig is. De oplossing van 10% kan echter enkele weken op 4 ℃ worden geplaatst zonder aanzienlijk activiteitsverlies. Verdien tot 10 ml en gooi weg wanneer de lijm niet kan aggregeren.
Tip: het percentage vanacrylamideBij sequentielijm en eiwitlijm is niet hetzelfde. Als u premade acrylamide: bis -oplossing gebruikt, zorg er dan voor dat u de juiste fles krijgt.
· Temed (n, n, n ', n'- tetramethylethyleendiamine) is een katalysator, in een bruine fles, in de koelkast geplaatst. Voeg net toe voordat je lijm giet.
· Polyacrylamide -elektroforese gebruikt glas in elektroforese moet voor en na elke keer worden gewassen. Was na elektroforese met een zachte borstel en doek in heet zeepwater, spoel met gedestilleerd water en blijf drogen.
· Vocht en stof kunnen veroorzaken met hol polymeer. Reinig vóór elektroforese de glazen plaat met glasreiniger en veeg deze met een zachte borstel. Was met gedestilleerd water en droog grondig met een papieren vegen. Spoelen met 70% ethanol voordat u met papier veegt, helpt het drogen schoon te maken en te versnellen. Voeg achtereenvolgens monsters van acrylamide toe: bis, water, bufferoplossing, ammoniumpersulfaat, temed. Schud goed en giet onmiddellijk.
Het is niet nodig om polyacrylamide te ontginnen vóór polymerisatie. (Acrylamide werd vroeger in een vacuüm geplaatst om bellen te verwijderen omdat zuurstof polymerisatie remt.)
Horizontale lijmpunttips.
· Doe een stuk zwart papier in de onderste doos, zwarte achtergrond om een voorbeeldgat te maken om duidelijker te zien.
· Lijm -tank gevulde buffer, net over de colloïde.
· Als de rand een licht heeft, zet u de lichten aan, laat het licht colloïden schijnt. Teken het monster in de pipet.
· Automatisch pipetten gebruiken.
· In 10-200 Mu 1 vloeistofbeweging kan in de meeste punten op het monster worden gebruikt. Voor zeer kleine monstergaten (minder dan 10μ1) is de lange pipetkop die wordt gebruikt voor sequentielijm handiger.
· Pipetting net ondergedompeld in het monster, inhaleren langzaam bewegend vloeistof. Het monster kan plakkerig lijken met glycerine en snel pompen kan luchtbellen in de pipetkop trekken.
· Monsters na het inhaleren van pipettekop zullen de vloeistofkop zachtjes op de rand van de pijp verplaatsen of het vegen papier zuigen vloeibare kop buiten de druppels. Pas op dat u het monster niet zuigt.
Plaats het monster in het monstergat
· Pipetteringsapparaat om een beetje druk te behouden, laat de monsters de overloop vloeibare kop enigszins bewegen.
· De pipetterende kop in de buffer, iets hoger dan de spotgaten, behouden positieve druk. De punt van de pipet kan in een klein gat worden ingebracht.
· Langzaam en gestaag de monsters uit. De pipetpunt wordt boven het puntmonstergat geplaatst en het monster zal in het gat zinken. Laat het monster zinken om het monstergat te vullen in plaats van erin te duwen.
· Zodra de laatste druppel monster met vloeibare kop, zal de vloeistof naar de tweede etappe gaan, langzaam de vloeistofbeweging verhogen, bewegen buffer
Hoe verticale lijmsteekponsters te doen?
· Verticale lijmpuntmonstergaten gevormd tussen twee stukken glas. In zeer dunne lijm kan de pipetkop niet eens worden ingebracht tussen twee glazen platen. Bekijk de glycerine! Plaats de pipetkop over het monstergat en het monster zal in het gat zinken.
· Puntmonster eerder, zorg ervoor dat u het verticale punt van polypropyleenacylgelmonstergat wordt geplaatst, wordt schoongemaakt. Was het ongepolymeriseerde acrylamide weg en het water dat op de bodem van het monstergat kan verschijnen. Het water kan het monstergat aanzienlijk kleiner maken. Gebruik een spuit van 25 ml of 50 ml en een 18-gauge naald. Giet de elektroforese -buffer erin en spoel het monstergat voorzichtig door.
· Het kan moeilijk zijn om het monstergat te zien, maar tegelijkertijd is de rest eenvoudig. Als er overtollige gaten zijn, kan de monsterbuffer worden getest met bromofenolblauw.
Posttijd: MAR-31-2023